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MMP-11CRISPR激活质粒(h) | sc-404334-ACT | 20 µg | $397.00 |
人类 MMP11 基因编码基质金属蛋白酶-11(matrix metalloproteinase-11,MMP-11;又称 stromelysin-3),这是一种分泌型、锌依赖性的内肽酶,能够重塑细胞外基质并调控细胞周围的蛋白水解过程。与许多 MMP 不同,MMP-11 可在细胞内由 furin 样转化酶激活,并影响基质—上皮相互作用、细胞迁移以及与创伤修复和发育过程相关的组织重塑程序。MMP-11 的活性与细胞外基质组织、整合素信号以及生长因子生物可利用性相互交织,从而塑造微环境线索,调控增殖与侵袭相关表型。MMP11 表达失调与肿瘤—基质重塑以及纤维化或炎症性微环境相关,使其成为开展基质驱动疾病生物学机制研究的一个重要靶点。
MMP-11 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MMP11的表达。
MMP-11 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的MMP11基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于MMP11转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性MMP-11表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的MMP11位点,并能够研究内源性位点上依赖于MMP-11的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MMP11表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MMP-11通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。