MMAB Double Nickase Plasmid (h): sc-409091-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MMAB Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MMAB Double-Nickase-Plasmid (h) und MMAB Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MMAB abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MMAB: sc-271424
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MMAB Double Nickase Plasmid (h) | sc-409091-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MMAB Double Nickase Plasmid (h2) | sc-409091-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MMAB kodiert eine Adenosyltransferase, die für den intrazellulären Vitamin‑B12‑ (Cobalamin‑)Stoffwechsel erforderlich ist, und katalysiert die Umwandlung von Cobalamin zu Adenosylcobalamin, dem essenziellen Cofaktor der Methylmalonyl‑CoA‑Mutase im mitochondrialen Propionatabbau. Über diesen Weg unterstützt MMAB einen effizienten Stofffluss von Methylmalonyl‑CoA zu Succinyl‑CoA und verknüpft so den Abbau von Aminosäuren und ungeradzahligen Fettsäuren mit dem Tricarbonsäurezyklus. Ein Funktionsverlust von MMAB stört den cobalaminabhängigen mitochondrialen Stoffwechsel und ist mit Methylmalonazidämie sowie verwandten angeborenen Stoffwechselstörungen assoziiert, die durch eine Anreicherung von Methylmalonat gekennzeichnet sind. MMAB stellt daher einen zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung der Biogenese mitochondrialer Cofaktoren, von metabolischen Stressantworten und von Genotyp‑Phänotyp‑Zusammenhängen bei Defekten im Cobalamin‑Stoffwechselweg dar.
MMAB Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MMAB-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MMAB abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MMAB-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MMAB-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.