MLTK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-437372

Descripción general

Map3k20 codifica la proteína similar a las quinasas de linaje mixto (MLTK), una MAP3K de serina/treonina que conecta señales ascendentes de estrés e inflamación con las cascadas de señalización MAPK, incluidas las vías de JNK y p38. Mediante la fosforilación de MAP2K aguas abajo, MLTK contribuye a la regulación de programas transcripcionales que controlan la apoptosis, la remodelación del citoesqueleto y la adaptación celular al estrés ambiental. En sistemas murinos, la actividad de Map3k20 se ha asociado con decisiones de destino celular en respuesta al estrés genotóxico y oxidativo, y puede influir en nodos de señalización que se cruzan con vías de inmunidad innata y de homeostasis tisular. La desregulación del “cableado” de la vía MAPK que involucra MAP3K como MLTK es ampliamente relevante en modelos de neurodegeneración, patología inflamatoria y señalización de estrés asociada al cáncer, lo que convierte a Map3k20 en un objetivo útil para el análisis mecanístico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MLTK (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Map3k20 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Map3k20 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Map3k20 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MLTK.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Map3k20 para la investigación de la señalización de MLTK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Map3k20 críticos para la función de MLTK
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Map3k20 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MLTK CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MLTK CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Map3k20. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MLTK (m) y el plásmido HDR MLTK (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Map3k20 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Map3k20 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.