MLL3 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402052-LAC

KMT2C (MLL3) kodiert eine Histon-Lysin-Methyltransferase mit SET-Domäne, die vor allem die Monomethylierung von H3K4 an Enhancern katalysiert und dadurch die Kommunikation zwischen Enhancer und Promotor sowie die Transkriptionsleistung prägt. Als zentraler Bestandteil COMPASS-ähnlicher Komplexe integriert MLL3 Chromatinsignale, um die Festlegung von Zelllinien, Differenzierungsprogramme und stimulusabhängige Genexpression in unterschiedlichen Signalgebungskontexten zu regulieren. Störungen von KMT2C werden in Krebsgenomdaten häufig beobachtet und stehen zudem mit veränderter epigenetischer Regulation bei Entwicklungs- und neurobiologischen Erkrankungen in Zusammenhang, was seine Rolle bei der Aufrechterhaltung der transkriptionellen Homöostase widerspiegelt. Diese Eigenschaften machen MLL3 zu einem wichtigen Knotenpunkt für die Untersuchung von Enhancer-Regulation, Chromatinarchitektur und kontextabhängiger Transkriptionskontrolle in menschlichen Zellen.

MLL3 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente KMT2C-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

MLL3 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der KMT2C-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen MLL3-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen KMT2C-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.