MLK2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-406968-LAC

MAP3K10 codifica a mixed lineage kinase 2 (MLK2), uma quinase quinase quinase de MAP quinases que integra sinais de estresse e inflamação a montante para regular as cascatas de MAPK, particularmente as vias de JNK e p38. Por meio da fosforilação de MKKs a jusante, a MLK2 influencia programas transcricionais que controlam apoptose, respostas de citocinas, dinâmica de neuritos e remodelamento do citoesqueleto. A sinalização desregulada de MLK2 tem sido associada à alteração da sobrevivência neuronal e da sinalização inflamatória, sustentando sua relevância para neurodegeneração, adaptação ao estresse em células cancerígenas e fenótipos associados ao sistema imune em modelos humanos. Como um nó de sinalização a montante de múltiplos ramos de MAPK, a MLK2 é frequentemente estudada quanto ao crosstalk entre vias, ativação de quinases dependente do estímulo e efeitos dependentes do contexto nas decisões de destino celular.

As Partículas de Ativação Lentivirais MLK2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de MAP3K10 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais MLK2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição MAP3K10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de MLK2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo MAP3K10 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.