Plásmido CRISPR de Activación (h) mitochondrial ferritin: sc-401694-ACT

FTMT codifica la ferritina mitocondrial, una proteína intramitocondrial de almacenamiento de hierro que secuestra hierro ferroso y limita la formación de especies reactivas de oxígeno catalizada por el hierro. Al amortiguar el hierro lábil dentro de la matriz mitocondrial, FTMT influye en la homeostasis del hierro, el metabolismo del hemo y de los clústeres hierro‑azufre, y el equilibrio redox mitocondrial en sentido amplio. La alteración de la expresión de FTMT se ha vinculado con la vulnerabilidad celular bajo estrés oxidativo y se estudia en contextos de neurodegeneración, desregulación del hierro asociada a anemias y disfunción mitocondrial. Como “guardián” del hierro mitocondrial, FTMT se investiga con frecuencia por su impacto en la respiración, la remodelación metabólica y la señalización de la respuesta al estrés.

mitochondrial ferritin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FTMT sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

mitochondrial ferritin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FTMT en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FTMT, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de mitochondrial ferritin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FTMT y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de mitochondrial ferritin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía mitochondrial ferritin en células tumorales con expresión de FTMT silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.