Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mig-6: sc-401922-ACT

ERRFI1 code pour le gène 6 inductible par les mitogènes (Mig-6), une protéine adaptatrice inductible qui agit comme régulateur de rétrocontrôle négatif de la signalisation de la famille EGFR/ERBB en limitant l’activité kinase des récepteurs ainsi que la sortie des voies MAPK/ERK et PI3K/AKT en aval. En modulant la prolifération, la différenciation et les réponses au stress induites par les facteurs de croissance, Mig-6 contribue au maintien de l’homéostasie des programmes cellulaires épithéliaux et mésenchymateux. Une expression ou une fonction altérée d’ERRFI1 a été associée à la dérégulation de la signalisation ERBB observée en biologie des cancers et a également été étudiée dans le contexte de la signalisation inflammatoire, du remodelage tissulaire et de phénotypes du développement. En tant que nœud de voie intégrant des signaux de récepteurs à activité tyrosine kinase, Mig-6 est couramment étudié dans les travaux portant sur l’atténuation du signal, le contrôle par rétroaction et la dépendance aux facteurs de croissance.

Mig-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ERRFI1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mig-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ERRFI1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ERRFI1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mig-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ERRFI1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mig-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mig-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de ERRFI1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.