Particules Lentivirales d'Activation (h2) MIAT: sc-437346-LAC-2

Le MIAT humain (myocardial infarction–associated transcript) est un long ARN non codant qui agit comme échafaudage régulateur dans le noyau et le cytoplasme, modulant l’expression génique par ses interactions avec des complexes associés à la chromatine et en tant qu’ARN endogène compétiteur, séquestrant des microARN. Il influence des programmes cellulaires clés, notamment le contrôle transcriptionnel, la maturation et le traitement des ARN, la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et les réponses au stress, avec des effets en aval sur des réseaux de signalisation impliqués dans la biologie vasculaire, la différenciation neuronale et la régulation de l’inflammation. Une expression dérégulée de MIAT a été rapportée dans des contextes cardiovasculaires et neurodégénératifs ainsi que dans de nombreux types de cancers, où elle est associée à des altérations de la prolifération, de l’angiogenèse et des décisions de destinée cellulaire. L’édition génétique ou la perturbation de MIAT permet d’analyser les mécanismes des circuits de régulation médiés par les lncARN, de cartographier les axes miARN–lncARN–ARNm et de mener des études fonctionnelles au moyen de modèles cellulaires humains pertinents pour la maladie et de lectures transcriptomiques/épigénomiques.

Les particules d'activation lentivirales MIAT (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MIAT (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription , où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MIAT. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.