MIAT Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-437346-ACT

MIAT (transcrito associado ao infarto do miocárdio) é um RNA longo não codificante humano que modula programas de expressão gênica ao influenciar a regulação associada à cromatina e ao atuar como um RNA endógeno concorrente, moldando a disponibilidade de microRNAs. Ele tem sido implicado na coordenação de vias ligadas ao controle do ciclo celular, à apoptose, à transição epitélio–mesênquima e à sinalização inflamatória, afetando assim a diferenciação celular e as respostas ao estresse. A expressão desregulada de MIAT foi relatada em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo o remodelamento cardiovascular e diversos cânceres, nos quais se correlaciona com fenótipos alterados de proliferação, invasão e angiogênese. Como um lncRNA regulatório, o MIAT é frequentemente estudado por seu papel na arquitetura de redes transcricionais e pós-transcricionais e para o mapeamento de reguladores a montante e genes efetores a jusante.

MIAT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MIAT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição , onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MIAT. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MIAT no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MIAT em células tumorais com expressão de silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.