MGMT CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-421647

개요

마우스 Mgmt는 O-6-메틸구아닌-DNA 메틸트랜스퍼레이스(MGMT)를 암호화하며, MGMT는 구아닌의 O6 위치에 형성된 알킬 부가체를 제거하는 직접 DNA 복구 효소이다. MGMT는 손상을 활성부위 시스테인으로 옮기는 단회성 “자살(suicide)” 반응을 통해 이를 수행한다. 이러한 활성은 내인성 및 환경성 알킬화 손상으로부터 발생하는 돌연변이 유발과 복제 스트레스를 상쇄하며, 불일치 복구(mismatch repair) 처리와 세포주기 체크포인트 신호전달에 영향을 주는 유전체 유지 프로그램과도 연계된다. MGMT 기능 또는 발현의 변화는 알킬화로 유도되는 유전체 불안정성과 종양 생물학 맥락에서 광범위하게 연구되어 왔는데, DNA 복구 능력이 돌연변이 스펙트럼과 세포 스트레스 반응을 좌우할 수 있기 때문이다. 마우스에서 Mgmt는 DNA 손상 반응 경로, 조직 특이적 복구 생물학, 그리고 알킬화 손상이 발암 및 신경독성 모델과 연결되는 기전을 조사하기에 다루기 쉬운 시스템을 제공한다.

MGMT CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 Mgmt 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 Mgmt 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 Mgmt의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 MGMT 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 MGMT 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 Mgmt 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• MGMT 기능에 중요한 Mgmt 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 Mgmt 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• MGMT CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 및 MGMT CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Mgmt 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  MGMT HDR 플라스미드 (m) 및 MGMT HDR 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 Mgmt 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 Mgmt 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.