mGluR-7 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406953

Descripción general

GRM7 codifica el receptor metabotrópico de glutamato 7 (mGluR-7), un GPCR de clase C que se acopla principalmente a proteínas Gi/o para reducir la actividad de la adenilato ciclasa y modular la función de los canales iónicos. Enriquecido en las zonas activas presinápticas, mGluR-7 actúa como autorreceptor/heterorreceptor que atenúa la liberación de neurotransmisores y ajusta la transmisión y la plasticidad sinápticas a través de la señalización cAMP/PKA y de las vías MAPK/ERK aguas abajo. Por su papel en la regulación del equilibrio excitación–inhibición y de la excitabilidad de los circuitos, GRM7 se estudia con frecuencia en el contexto de fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, así como de mecanismos de susceptibilidad a las convulsiones y de conductas relacionadas con el estrés. La señalización de mGluR-7 en humanos también es relevante para la organización sináptica y el remodelado dependiente de la actividad, lo que lo convierte en un nodo útil para el análisis a nivel de vías en modelos neuronales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO mGluR-7 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GRM7 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GRM7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GRM7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína mGluR-7.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GRM7 para la investigación de la señalización de mGluR-7, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GRM7 críticos para la función de mGluR-7
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GRM7 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido mGluR-7 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido mGluR-7 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GRM7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR mGluR-7 (h) y el plásmido HDR mGluR-7 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GRM7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GRM7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.