Plásmido Doble Nickase (h) mGluR-4: sc-404894-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)mGluR-4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa mGluR-4 (h) y el plásmido de doble nickasa mGluR-4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GRM4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: mGluR-4 Anticuerpo (B-8): sc-376485
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) mGluR-4 | sc-404894-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) mGluR-4 | sc-404894-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRM4 codifica el receptor metabotrópico de glutamato 4 (mGluR-4), un GPCR de clase C que se acopla principalmente a proteínas Gi/o para atenuar la actividad de la adenilato ciclasa y reducir el AMPc intracelular. mGluR-4 está enriquecido en sitios presinápticos, donde modula la liberación de neurotransmisores, dando forma a la transmisión y la plasticidad sinápticas a través de la señalización AMPc/PKA y de efectos posteriores sobre la función de los canales iónicos y el ciclo de las vesículas. Al ajustar la salida de los circuitos excitatorios e inhibitorios, GRM4 se estudia en vías que gobiernan el control motor, el procesamiento sensorial y la señalización neuroinmunitaria en el sistema nervioso central. La señalización glutamatérgica desregulada que involucra a GRM4 se ha investigado en el contexto de la biología de enfermedades neuropsiquiátricas y neurodegenerativas, lo que respalda su uso como punto de entrada molecular para estudios mecanísticos de fenotipos sinápticos y de circuitos.
mGluR-4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GRM4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GRM4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GRM4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GRM4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.