MFSD2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429366

Descripción general

Mfsd2a codifica MFSD2, un transportador de la superfamilia de facilitadores mayores implicado en el manejo de lípidos y la homeostasis de membrana, con funciones bien establecidas en la biología endotelial y la fisiología del tejido neural. En la barrera hematoencefálica, MFSD2 contribuye a la regulación de la transcitosis e influye en el aporte de lisofosfolípidos como los ácidos grasos omega-3 unidos a LPC, impactando así la integridad de la unidad neurovascular y la función neuronal. La actividad alterada de MFSD2A se ha asociado con propiedades de barrera alteradas, fenotipos del neurodesarrollo y cambios en la señalización inflamatoria vinculados al estrés endotelial y metabólico. En modelos murinos, Mfsd2a ofrece un punto de entrada manejable para estudiar la señalización acoplada al transporte de lípidos, el control de la permeabilidad vascular y la adaptación metabólica específica de tejido.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MFSD2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Mfsd2a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Mfsd2a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Mfsd2a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MFSD2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Mfsd2a para la investigación de la señalización de MFSD2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Mfsd2a críticos para la función de MFSD2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Mfsd2a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MFSD2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MFSD2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Mfsd2a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MFSD2 (m) y el plásmido HDR MFSD2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Mfsd2a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Mfsd2a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.