Plásmido Doble Nickase (m) Mfn1/Mitofusin 1: sc-426545-NIC

El gen Mfn1 de ratón codifica la mitofusina 1, una GTPasa relacionada con la dinamina incrustada en la membrana mitocondrial externa que impulsa el anclaje y la fusión mitocondrial. MFN1 coordina la arquitectura de la red mitocondrial, favorece la eficiencia de la fosforilación oxidativa y contribuye al mantenimiento del ADN mitocondrial y a la adaptación al estrés a través de vías de dinámica mitocondrial. Su actividad se cruza con procesos de control de calidad como la mitofagia y la señalización de apoptosis al influir en el potencial de membrana, la organización de las crestas y la comunicación entre orgánulos. La desregulación de la fusión ligada a MFN1 se asocia con alteraciones de la bioenergética y se estudia con frecuencia en el contexto de la neurodegeneración, la disfunción cardiometabólica y las transiciones de estado en células cancerosas, donde la remodelación mitocondrial impacta el fenotipo.

Mfn1/Mitofusin 1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Mfn1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Mfn1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Mfn1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Mfn1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.