Mfn1/Mitofusin 1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400637-NIC

MFN1 kodiert Mitofusin 1 (Mfn1), eine dynaminähnliche GTPase, die in der äußeren Mitochondrienmembran verankert ist, die mitochondriale Fusion vermittelt und zur Aufrechterhaltung der Architektur des mitochondrialen Netzwerks beiträgt. Durch Homo- und Hetero-Oligomerisierung mit MFN2 sowie durch die Kopplung an die OPA1-abhängige Fusion der inneren Membran beeinflusst Mfn1 die mitochondriale Dynamik, die Organisation der Cristae und die bioenergetische Leistungsfähigkeit. Die MFN1-Aktivität überschneidet sich mit Mitophagie, Apoptose-Signalwegen und der Regulation von ER–Mitochondrien-Kontakten und prägt dadurch zelluläre Antworten auf metabolischen Stress und Qualitätskontrolle. Ein gestörtes Gleichgewicht von Fusion und Spaltung der Mitochondrien unter Beteiligung von MFN1 wurde in mechanistischen Studien mit Neurodegeneration, kardiometabolischen Funktionsstörungen und krebsassoziiertem metabolischem Remodeling in Verbindung gebracht.

Mfn1/Mitofusin 1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MFN1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MFN1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MFN1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MFN1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.