Plásmido CRISPR de Activación (h) Metallothionein 3: sc-403201-ACT

El MT3 humano codifica la metalotioneína 3, una proteína rica en cisteína que se une a metales, regula la disponibilidad intracelular de zinc y cobre y contribuye al tamponamiento redox mediante la eliminación, basada en grupos tiol, de especies reactivas de oxígeno. MT3 influye en la señalización dependiente de metales, la defensa antioxidante y la proteostasis, vinculando las respuestas celulares al estrés con programas transcripcionales regulados por elementos sensibles a metales y por vías de estrés oxidativo. En el sistema nervioso se ha asociado con la diferenciación neuronal, la función sináptica y la resistencia a la toxicidad inducida por metales, y se ha descrito una expresión alterada de MT3 en contextos neurodegenerativos y neuroinflamatorios. La homeostasis metálica desregulada y el daño oxidativo relacionados con la biología de MT3 también son relevantes en modelos del metabolismo de células cancerosas y de adaptación al estrés.

Metallothionein 3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MT3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Metallothionein 3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MT3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MT3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Metallothionein 3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MT3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Metallothionein 3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Metallothionein 3 en células tumorales con expresión de MT3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.