Mel-CAM Lentiviral Activation Particles (h): sc-401020-LAC

MCAM kodiert Mel-CAM (CD146), ein Adhäsionsmolekül der Immunglobulin-Superfamilie an der Zelloberfläche, das Zell-Zell- und Zell-Matrix-Interaktionen, die Organisation endothelialer Zellkontakte sowie das Remodeling des Zytoskeletts reguliert. Mel-CAM ist an Prozessen der Gefäßbiologie beteiligt, darunter Angiogenese, Transmigration von Leukozyten und Barrierefunktion, und wurde mit Signalprogrammen in Verbindung gebracht, die auf die Dynamik fokaler Adhäsionen und eine durch Rho-Familien-GTPasen vermittelte Motilität zusammenlaufen. Eine dysregulierte MCAM-Expression wird häufig im Kontext von Tumorprogression und Metastasierung, der Melanombiologie und vaskulären Entzündungen untersucht, bei denen veränderte Adhäsion und Migration zu Krankheitsphänotypen beitragen. Darüber hinaus wird MCAM als Marker verwendet, um endotheliale und perivaskuläre Zellzustände zu untersuchen und die Heterogenität in stromalen und immunologischen Mikroumgebungen zu profilieren.

Mel-CAM Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente MCAM-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Mel-CAM Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der MCAM-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Mel-CAM-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen MCAM-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.