Plasmide Double Nickase (h) MEK-1: sc-400397-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MEK-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MEK-1 Double Nickase (h) et le plasmide MEK-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MAP2K1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MEK-1 Antibody (H-8): sc-6250
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MEK-1 | sc-400397-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MEK-1 | sc-400397-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAP2K1 code pour MEK‑1, une kinase à double spécificité qui phosphoryle et active ERK1/2 au sein de la cascade MAPK canonique RAS–RAF–MEK–ERK. MEK‑1 intègre des signaux provenant des récepteurs à activité tyrosine kinase ainsi que d’autres entrées en amont afin de réguler la prolifération, la différenciation, la survie et les programmes transcriptionnels via des effecteurs dépendants d’ERK. Une signalisation MAP2K1/MEK‑1 dérégulée contribue à la sortie anormale de la voie MAPK observée dans divers modèles de cancer et dans des troubles du développement, ce qui en fait un nœud largement utilisé pour étudier l’architecture de la voie et la régulation par rétrocontrôle. Dans les cellules humaines, la perturbation de MAP2K1 offre une lecture accessible de la dynamique de la signalisation MAPK, notamment la phosphorylation d’ERK et les modifications de l’expression génique en aval.
MEK-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MAP2K1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MAP2K1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MAP2K1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MAP2K1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.