MDR1/ABCB1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400178-ACT

ABCB1（MDR1／P-糖タンパク質）はATP結合カセット（ABC）トランスポーターであり、幅広い外来性化合物（キセノバイオティクス）および内因性代謝産物を細胞膜を介して細胞外へ排出し、細胞内の薬物蓄積量やバリア機能に影響を与える。腸管、肝臓、腎臓、血液脳関門などを含む上皮・内皮組織で高発現しており、解毒や組織保護に寄与する。MDR1／ABCB1の活性は、細胞傷害性化合物への曝露を制限し、細胞の恒常性に影響することで、薬物動態やストレス応答過程とも密接に関わる。ABCB1発現の異常は、がんモデルにおける多剤耐性表現型や、神経疾患・炎症性疾患の文脈における薬剤応答の個体差と広く関連づけられている。

MDR1/ABCB1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCB1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MDR1/ABCB1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCB1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCB1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MDR1/ABCB1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCB1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMDR1/ABCB1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCB1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMDR1/ABCB1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。