MDH2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402825-NIC

MDH2 codifica la malato deidrogenasi mitocondriale, un enzima NAD-dipendente che catalizza la conversione reversibile del malato in ossalacetato, sostenendo il ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA) e l’omeostasi redox mitocondriale. Grazie al suo ruolo nel metabolismo ossidativo, MDH2 contribuisce alla produzione di ATP, all’equilibrio NADH/NAD⁺ e al flusso anaplerotico che collega la funzione mitocondriale al più ampio metabolismo del carbonio. Alterazioni dell’attività di MDH2 possono modificare la capacità respiratoria e la segnalazione metabolica, processi frequentemente analizzati negli studi sul metabolismo tumorale, sui disturbi mitocondriali e sulla neurodegenerazione. In quanto enzima centrale della matrice mitocondriale, MDH2 è rilevante anche per indagare l’adattamento metabolico all’ipossia, allo stress da nutrienti e alla dinamica delle specie reattive dell’ossigeno.

MDH2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MDH2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MDH2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MDH2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MDH2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.