MCT9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-409073-ACT

SLC16A9 kodiert den Monocarboxylat-Transporter 9 (MCT9), einen membranständigen Transporter aus der Solute-Carrier-16-Familie, der am transmembranen Transport kleiner organischer Säuren und verwandter Metabolite beteiligt ist. MCT9 trägt zur zellulären metabolischen Homöostase bei, indem es die Substratverfügbarkeit für die mitochondriale Oxidation, das Redox-Gleichgewicht und übergeordnete Nährstoffsensorik-Prozesse beeinflusst. Expressionsmuster und genetische Assoziationen bringen SLC16A9 mit der systemischen Regulation von Metaboliten in Verbindung, einschließlich der Harnsäurehandhabung und nierenassoziierter Transportphysiologie. Daher wird SLC16A9 häufig im Kontext metabolischer Merkmale und Erkrankungen untersucht, bei denen veränderte Metabolitflüsse und Transporteraktivität die Funktion von Zellen und Geweben prägen.

MCT9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC16A9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MCT9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC16A9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC16A9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MCT9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC16A9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MCT9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MCT9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC16A9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.