Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MCH-1R Double Nickase Plasmid (h): sc-402512-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MCH-1R Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MCH-1R Double-Nickase-Plasmid (h) und MCH-1R Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MCHR1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MCH-1R: sc-100327
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MCH-1R Double Nickase Plasmid (h) | sc-402512-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MCH-1R Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402512-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Der Melanin-konzentrierende-Hormon-Rezeptor 1 (MCHR1) kodiert MCH-1R, einen GPCR der Klasse A, der die Signalübertragung des Neuropeptids MCH im zentralen Nervensystem und in peripheren Geweben vermittelt. Nach Ligandenbindung koppelt MCH-1R vorwiegend an Gi/o- und Gq-Signalwege, um cAMP-Spiegel, intrazelluläre Calciumflüsse und nachgeschaltete MAPK/ERK-Signalgebung zu modulieren und so neuroendokrine Signale mit zellulärer Erregbarkeit und transkriptionellen Antworten zu integrieren. Dieser Rezeptor ist an Schaltkreisen beteiligt, die Energiebilanz, Fressverhalten, Wachheit und belohnungsbezogene Prozesse steuern, wodurch er mit mechanistischen Studien zu metabolischer Dysregulation und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung steht. Veränderte MCH-1R-Signalgebung wurde im Kontext der Adipositasbiologie sowie stimmungs- und angstassoziierter Signalwege untersucht, was MCHR1 zu einem relevanten Ziel für die Analyse von Signalwegen in neuronalen und metabolischen Zellmodellen macht.
MCH-1R Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MCHR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MCHR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MCHR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MCHR1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.