MC5-R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403844-ACT

Humanes **MC5R** kodiert den Melanocortin-Rezeptor 5 (MC5-R), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der durch Melanocortin-Peptide aktiviert wird, die aus der Prozessierung von POMC hervorgehen. MC5-R koppelt vorwiegend an Gs, stimuliert dadurch die Adenylylcyclase, erhöht cAMP und aktiviert PKA/CREB‑abhängige Transkriptionsprogramme; nachgeschaltete Effekte können dabei in MAPK‑Signalwege und umfassendere regulatorische GPCR‑Netzwerke hineinspielen. In immunologischen und epithelialen Kontexten wurde MC5-R‑Signalgebung mit der Modulation des Entzündungsniveaus, der sekretorischen Aktivität und der zellulären Homöostase in Verbindung gebracht. Eine veränderte Aktivität des Melanocortin‑Signalwegs wurde im Zusammenhang mit Hautbiologie, metabolischer Regulation und inflammatorischen Phänotypen untersucht, was den Einsatz von **MC5R** als mechanistischen Knotenpunkt in Pathway‑Mapping‑Studien unterstützt.

MC5-R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MC5R-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MC5-R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MC5R-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MC5R-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MC5-R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MC5R-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MC5-R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MC5-R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MC5R-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.