Plasmide Double Nickase (h) MC4-R: sc-417769-NIC

MC4R code le récepteur de la mélanocortine 4 (MC4‑R), un récepteur couplé aux protéines G qui intègre les signaux de l’α‑MSH et d’autres mélanocortines afin de réguler, au niveau neuronal, l’équilibre énergétique et le comportement alimentaire. MC4‑R se couple principalement à Gs pour stimuler l’adénylate cyclase et des programmes transcriptionnels dépendants de l’AMPc/PKA, et il interagit avec les circuits hypothalamiques leptine–POMC ainsi qu’avec des réseaux neuroendocriniens homéostatiques plus larges. Une altération de la signalisation de MC4R est fortement associée à une dérégulation de l’appétit et à des phénotypes de poids corporel, ce qui en fait un nœud central dans les études de la régulation métabolique. Dans des modèles cellulaires et organismiques, la perturbation de MC4R est utilisée pour cartographier la signalisation des GPCR, le trafic et la désensibilisation du récepteur, ainsi que les réponses transcriptionnelles en aval liées à l’homéostasie énergétique.

MC4-R Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MC4R dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MC4R. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MC4R. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MC4R.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.