20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
El Plásmido Double Nickase (h)MC4-R consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
El plásmido de doble nickasa MC4-R (h) y el plásmido de doble nickasa MC4-R (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MC4R. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MC4-R Anticuerpo (C-10): sc-55567