Plasmide CRISPR/Cas9 KO MBOAT2 (m): sc-426448

Présentation

Mboat2 code la protéine « membrane bound O-acyltransferase domain containing 2 » (MBOAT2), une acyltransférase associée au réticulum endoplasmique (RE) et aux membranes, impliquée dans le remodelage des phospholipides via la réacylation des lysophospholipides. En modulant l’incorporation d’acides gras dans les glycérophospholipides membranaires, MBOAT2 peut influencer la composition des membranes, l’homéostasie des organites et des processus de signalisation dépendants des lipides liés aux réponses au stress cellulaire. Un métabolisme des phospholipides altéré est largement pertinent pour la dysfonction métabolique, l’inflammation et le remodelage membranaire associé au cancer, ce qui fait de Mboat2 un point d’entrée utile pour des études mécanistiques des phénotypes pilotés par les lipides. Dans les systèmes murins, la perturbation génétique de Mboat2 permet une analyse au niveau des voies des réseaux d’acyltransférases et du remodelage lipidique compensatoire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MBOAT2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mboat2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mboat2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mboat2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MBOAT2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mboat2 pour l'étude de la signalisation de MBOAT2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mboat2 essentiels à la fonction de MBOAT2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mboat2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MBOAT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MBOAT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mboat2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MBOAT2 plasmide HDR (m) et le MBOAT2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mboat2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mboat2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.