MBD2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401561-ACT

A MBD2 humana (proteína 2 com domínio de ligação a metil-CpG) é uma leitora da metilação do DNA que se liga a dinucleótidos CpG metilados e ajuda a traduzir marcas epigenéticas em resultados transcricionais. Por meio de interações com complexos de remodelação da cromatina e de desacetilases de histonas, como o NuRD, a MBD2 contribui para o silenciamento génico, a compactação da cromatina e a regulação de programas específicos de linhagem. Influencia processos como a diferenciação celular, a sinalização imunitária e a manutenção da estabilidade epigenética em todo o genoma. A atividade desregulada da MBD2 e a repressão dependente de metilação alterada têm sido associadas a redes transcricionais aberrantes observadas no cancro e noutras doenças que envolvem desequilíbrio epigenético.

MBD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MBD2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MBD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MBD2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MBD2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MBD2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MBD2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MBD2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MBD2 em células tumorais com expressão de MBD2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.