MATH-5 Lentiviral Activation Particles (h): sc-415110-LAC

ATOH7 kodiert den basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor MATH-5, einen zentralen Regulator der neurogenen Kompetenz und der Festlegung der Zelllinie retinaler Ganglienzellen während der menschlichen Augenentwicklung. MATH-5 integriert proneurale Transkriptionsprogramme mit Notch- und anderen entwicklungsbiologischen Signalinputs, um den Austritt aus dem Zellzyklus und die neuronale Differenzierung zu koordinieren. Eine dysregulierte ATOH7-Aktivität wurde mit einer veränderten Sehnervenbildung und einer erhöhten Anfälligkeit für Optikusneuropathien in Verbindung gebracht, was das Gen für Studien zur retinalen Entwicklung und zu Erkrankungen des visuellen Systems relevant macht. Da ATOH7 stromaufwärts mehrerer neuronaler Schicksalsdeterminanten wirkt, wird es häufig genutzt, um genregulatorische Netzwerke zu untersuchen, die Neurogenese und retinale Zellidentität steuern.

MATH-5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ATOH7-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

MATH-5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ATOH7-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen MATH-5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ATOH7-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.