MATH-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419232

Übersicht

Neurod4 kodiert den basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor MATH-3, einen neurogenen Regulator, der während der Mausentwicklung die Festlegung auf die neuronale Zelllinie und die Differenzierung fördert. MATH-3 wirkt in transkriptionellen Programmen, die proneurale bHLH-Netzwerke und Notch-abhängige Entscheidungen integrieren, um den Austritt aus dem Zellzyklus, die Spezifikation neuronaler Subtypen und die Reifung zu koordinieren. Durch die Kontrolle der nachgeschalteten Genexpression in sich entwickelnden neuralen Geweben beeinflusst Neurod4 die Neurogenese, das Neuritenauswachsen und die Initiierung synaptischer Programme. Eine dysregulierte Aktivität neurogener bHLH-Faktoren ist allgemein relevant für neuroentwicklungsbiologische Mechanismen und für Modelle, die veränderte Zustände der neuronalen Differenzierung untersuchen.

Das MATH-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Neurod4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Neurod4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Neurod4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MATH-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Neurod4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MATH-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Neurod4-Exone abzielen, die für die MATH-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Neurod4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MATH-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom MATH-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Neurod4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MATH-3 HDR-Plasmid (m) und MATH-3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Neurod4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Neurod4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.