Particules Lentivirales d'Activation (h) MATH-1: sc-404171-LAC

ATOH1 (MATH-1) code un facteur de transcription de type hélice-boucle-hélice basique (bHLH) qui orchestre l’engagement de lignée et les programmes de différenciation au cours du développement humain. MATH-1 régule des réseaux de gènes contrôlant la neurogenèse et les décisions de destinée des cellules épithéliales, en s’intégrant à l’inhibition latérale dépendante de Notch, à la signalisation Wnt/β-caténine et au remodelage de la chromatine afin de spécifier le devenir des progéniteurs. Une expression ou une activité dérégulée d’ATOH1 a été associée à des états de différenciation altérés et à une prolifération aberrante dans de multiples contextes tissulaires, ce qui en fait un point d’entrée moléculaire pertinent pour l’étude de circuits transcriptionnels ancrés dans le développement. En tant que nœud de voies déterminant le destin cellulaire, ATOH1 est fréquemment étudié dans des modèles de spécification des lignées neurales et sensorielles, d’homéostasie épithéliale et de reprogrammation de l’identité cellulaire induite par des facteurs de transcription.

Les particules d'activation lentivirales MATH-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ATOH1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MATH-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ATOH1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MATH-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ATOH1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.