Plásmido Doble Nickase (h) MAT IIα: sc-402566-NIC

MAT2A codifica la subunidad α catalítica de la metionina adenosiltransferasa II (MAT IIα), que sintetiza S-adenosil-L-metionina (SAM), el principal donador de grupos metilo para las reacciones de metilación de ADN, ARN e histonas. Al controlar la disponibilidad intracelular de SAM, MAT IIα conecta el ciclo de la metionina y el metabolismo de un carbono con la regulación epigenética, la biosíntesis de poliaminas y el equilibrio redox a través de la transulfuración. La actividad de MAT2A está estrechamente acoplada a programas proliferativos y a estados de detección de nutrientes, lo que la hace relevante para estudios de adaptación metabólica y de regulación génica dependiente de la cromatina. Se han reportado alteraciones en la expresión o dependencia de MAT2A en múltiples contextos patológicos, incluido el metabolismo del cáncer y la fisiopatología relacionada con el hígado, lo que respalda su uso como una herramienta molecular para investigar fenotipos impulsados por la metilación.

MAT IIα El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MAT2A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MAT2A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MAT2A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MAT2A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.