Maspin Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416693-LAC

Il gene umano **SERPINB5** codifica la **maspin**, un membro della famiglia delle serpine privo di attività inibitoria, con funzioni oncosoppressive dipendenti dal contesto che influenzano la differenziazione epiteliale, l’adesione cellulare e la motilità. La maspin è stata collegata alla regolazione del rimodellamento della matrice extracellulare e della segnalazione associata alle proteasi, con effetti riportati sulla dinamica delle adesioni focali e sulle risposte cellulari allo stress. Alterazioni dell’espressione di **SERPINB5** e della sua localizzazione subcellulare sono state associate alla progressione e al potenziale metastatico in diversi carcinomi, rendendola un marcatore utile per studiare la plasticità epitelio–mesenchimale. In modelli di carcinoma mammario, prostatico e pancreatico, la modulazione della maspin è stata utilizzata per indagare le vie che regolano l’invasione, i programmi legati all’angiogenesi e il controllo trascrizionale dello stato di linea cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale Maspin (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SERPINB5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Maspin (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SERPINB5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Maspin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SERPINB5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.