Maspin Lentiviral Activation Particles (h): sc-416693-LAC

Das humane SERPINB5 kodiert Maspin, ein nicht-inhibitorisches Mitglied der Serpin-Familie mit kontextabhängigen tumorunterdrückenden Aktivitäten, die die epitheliale Differenzierung, Zelladhäsion und Motilität beeinflussen. Maspin wird mit der Regulation des Umbaus der extrazellulären Matrix und proteaseassoziierten Signalwegen in Verbindung gebracht; beschrieben wurden zudem Effekte auf die Dynamik fokaler Adhäsionen und zelluläre Stressantworten. Veränderte SERPINB5-Expression und subzelluläre Lokalisation wurden bei mehreren Karzinomen mit Progression und Metastasierungspotenzial assoziiert, was es zu einem nützlichen Marker für die Untersuchung epithelial-mesenchymaler Plastizität macht. In Modellen für Brust-, Prostata- und Pankreaskarzinom wurde die Modulation von Maspin genutzt, um Signalwege zu untersuchen, die Invasion, angiogenesebezogene Programme und die transkriptionelle Kontrolle des Linienzellzustands steuern.

Maspin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SERPINB5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Maspin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SERPINB5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Maspin-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SERPINB5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.