Plasmide CRISPR/Cas9 KO MARK3 (h): sc-406362

Présentation

MARK3 (microtubule affinity-regulating kinase 3) est une kinase sérine/thréonine de la famille PAR-1/MARK qui phosphoryle des protéines associées aux microtubules, notamment tau, afin de moduler la dynamique des microtubules et la polarité cellulaire. Elle agit en aval de signaux régulant la polarité et s’inscrit au carrefour de voies contrôlant le remodelage du cytosquelette, le trafic vésiculaire et la progression du cycle cellulaire. Par ses rôles dans la morphogenèse neuronale et la spécification axone-dendrites, une activité dérégulée de MARK3 a été associée à une phosphorylation aberrante de tau et à des processus liés à la neurodégénérescence. MARK3 est également étudiée dans des contextes de perte de polarité épithéliale et de migration altérée, où l’instabilité des microtubules contribue à des phénotypes cellulaires pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MARK3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MARK3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MARK3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MARK3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MARK3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MARK3 pour l'étude de la signalisation de MARK3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MARK3 essentiels à la fonction de MARK3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MARK3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MARK3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MARK3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MARK3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MARK3 plasmide HDR (h) et le MARK3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MARK3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MARK3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.