Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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MARCKSL1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403985
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MARCKSL1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MARCKSL1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MARCKSL1 Antibody (K53): sc-130471
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MARCKSL1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403985 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
MARCKSL1 (MARCKS-like 1) codifica una proteina legante l’actina, associata alla membrana, che regola il rimodellamento del citoscheletro, la forma cellulare e la motilità attraverso interazioni dipendenti dalla fosforilazione con i fosfolipidi e la rete di actina. Partecipa a processi legati alla crescita dei neuriti, alla migrazione cellulare e alla dinamica dell’adesione, integrando segnali a valle di chinasi come la PKC e di vie che controllano la formazione dei lamellipodi. Un’alterata espressione di MARCKSL1 è stata associata a cambiamenti del comportamento invasivo e dei programmi di proliferazione in molteplici contesti tumorali; inoltre, è studiato anche nella biologia dello sviluppo neurocognitivo, dove la riorganizzazione dell’actina è cruciale. Queste proprietà rendono MARCKSL1 un nodo utile per analizzare fenotipi cellulari guidati dall’actina e l’accoppiamento tra segnalazione e citoscheletro.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MARCKSL1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MARCKSL1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MARCKSL1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MARCKSL1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MARCKSL1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MARCKSL1 per lo studio della segnalazione di MARCKSL1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni MARCKSL1 critici per la funzione di MARCKSL1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MARCKSL1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MARCKSL1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MARCKSL1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MARCKSL1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MARCKSL1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MARCKSL1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MARCKSL1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MARCKSL1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.