Plásmido Doble Nickase (m) MARCH1: sc-428465-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)MARCH1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MARCH1 (m) y el plásmido de doble nickasa MARCH1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a March1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) MARCH1 | sc-428465-NIC | 20 µg | $410.00 |
MARCH1 de ratón (membrane associated ring-CH-type finger 1) codifica una ligasa E3 de ubiquitina que se localiza en compartimentos endosomales y de la membrana plasmática, y regula la señalización inmunitaria controlando la ubiquitinación y el tráfico de proteínas clave de la superficie celular. MARCH1 promueve la internalización y degradación de moléculas de presentación de antígeno como el MHC de clase II y de la molécula coestimuladora CD86, modulando la activación de células dendríticas y linfocitos B, la tolerancia periférica y las respuestas inflamatorias. Mediante la clasificación dependiente de ubiquitina y el recambio lisosomal, MARCH1 conecta la homeostasis de proteínas de membrana con vías que gobiernan la endocitosis, el transporte vesicular y la inmunidad adaptativa. La actividad desregulada de MARCH1 se ha implicado en alteraciones de la presentación de antígeno y de la homeostasis inmunitaria, lo que respalda su estudio en modelos de autoinmunidad, infección e interacciones entre tumores y el sistema inmunitario.
MARCH1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus March1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de March1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de March1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con March1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.