MAO-B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401732-ACT

MAOB kodiert die Monoaminooxidase B (MAO‑B), ein flavinabhängiges Enzym, das an der äußeren Mitochondrienmembran lokalisiert ist und die oxidative Desaminierung biogener und mit der Nahrung aufgenommener Amine katalysiert. Durch die Regulation des Abbaus von Dopamin, Phenethylamin und verwandten Monoaminen beeinflusst MAO‑B die Neurotransmitterhomöostase und erzeugt dabei als Nebenprodukt Wasserstoffperoxid, wodurch ihre Aktivität mit dem mitochondrialen Redoxgleichgewicht und Signalwegen des oxidativen Stresses verknüpft ist. Die Funktion von MAO‑B überschneidet sich mit monoaminerger Signalübertragung, mitochondrialem Stoffwechsel und zellulären Stressantworten in neuralen und peripheren Geweben. Eine veränderte MAOB-Expression oder MAO‑B‑Aktivität wurde mit neurodegenerativen und neuropsychiatrischen Prozessen sowie mit entzündungs- und alterungsassoziierten molekularen Phänotypen in Verbindung gebracht und stützt mechanistische Studien zum Monoaminumsatz und zu ROS‑abhängigen Prozessen.

MAO-B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAOB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MAO-B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAOB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAOB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MAO-B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAOB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MAO-B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MAO-B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAOB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.