Plasmide CRISPR d'Activation (h) MAN2C1: sc-404066-ACT

Le gène humain **MAN2C1** code l’α-mannosidase cytosolique 2C1, une glycosidase qui catalyse l’élagage de résidus mannose α-1,2/α-1,3/α-1,6 à partir d’oligosaccharides libres libérés lors du renouvellement des N‑glycoprotéines. En participant au catabolisme cytosolique des oligosaccharides libres et aux processus de contrôle qualité des glycannes liés à la dégradation associée au réticulum endoplasmique (ERAD), MAN2C1 contribue à réguler la protéostasie cellulaire et l’homéostasie des glucides. Une activité altérée de MAN2C1 peut perturber le traitement des glycannes et les voies de réponse au stress, ce qui en fait une cible pertinente pour des études sur le remodelage métabolique, le contrôle qualité des protéines et les phénotypes associés à la glycosylation observés dans divers contextes pathologiques.

MAN2C1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAN2C1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAN2C1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAN2C1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAN2C1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAN2C1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAN2C1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAN2C1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAN2C1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAN2C1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.