MAK Lentiviral Activation Particles (m): sc-421549-LAC

Mouse Mak kodiert die male germ cell–associated Kinase (MAK), eine Serin/Threonin-Kinase aus der MAPK-verwandten Familie, die phosphorylierungsabhängige Signalwege und zellzyklusgekoppelte Prozesse moduliert. Die MAK-Aktivität wird mit der Regulation des mitotischen Fortschreitens und von Differenzierungsprogrammen in Verbindung gebracht; in spezialisierten Geweben wurde sie zudem mit der Biologie von Zilien und Photorezeptoren assoziiert. Fehlregulierte, MAK-beteiligte Kinase-Signalgebung wurde in Zusammenhängen abnormer Zellproliferation und Gewebehomöostase untersucht, was ihre Relevanz für mechanistische Studien von Kinase-Netzwerken in Entwicklungs- und Krankheitsmodellen unterstreicht. MAK ist daher ein nützliches Ziel, um das Zusammenspiel zwischen Zellzykluskontrolle, Zytoskelettorganisation und Signaltransduktion in Maus-Systemen zu untersuchen.

MAK Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Mak-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

MAK Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Mak-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen MAK-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Mak-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.