mAChR M1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401453-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das mAChR M1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- mAChR M1 Double-Nickase-Plasmid (h) und mAChR M1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHRM1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: mAChR M1: sc-365966
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
mAChR M1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401453-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
mAChR M1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401453-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRM1 kodiert den humanen muskarinischen Acetylcholinrezeptor M1 (mAChR M1), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der hauptsächlich über Gq/11 signalisiert, um die Phospholipase Cβ zu aktivieren, das intrazelluläre Ca²⁺ zu erhöhen und PKC‑abhängige Transkriptionsprogramme zu stimulieren. mAChR M1 moduliert die neuronale Erregbarkeit, die synaptische Plastizität und die cholinerge Regulation kortikaler und hippokampaler Schaltkreise und übernimmt darüber hinaus Funktionen in peripherer glatter Muskulatur und sekretorischen Geweben. Die nachgeschaltete Einbindung von MAPK/ERK‑ und PI3K‑assoziierten Signalwegen verknüpft die CHRM1‑Aktivität mit Veränderungen der Genexpression, des Zellstoffwechsels sowie der Desensibilisierungs‑/Internalisierungsdynamik des Rezeptors. Dysregulierte cholinerge Signalübertragung unter Beteiligung von CHRM1 wurde im Kontext kognitiver und neuropsychiatrischer Phänotypen untersucht, ebenso wie umfassendere Veränderungen von GPCR‑Signalwegen, die in krankheitsrelevanten zellulären Modellen beobachtet werden.
mAChR M1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHRM1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHRM1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHRM1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHRM1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.