LYPD8 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418674-ACT

LYPD8 (Ly6/PLAUR-Domäne enthaltend 8) kodiert ein sezerniertes, glycosylphosphatidylinositol‑(GPI-)assoziiertes Protein der Ly6-Familie, das an mukosalen Oberflächen angereichert ist und dort zur Homöostase der epithelialen Barriere sowie zu Wirt–Mikroben-Interaktionen beiträgt. Im Gastrointestinaltrakt ist LYPD8 daran beteiligt, den Zugang von Bakterien zur Epithelschicht zu begrenzen, indem es die mikrobielle Motilität und die räumliche Organisation innerhalb des Schleims moduliert und dadurch den Tonus der angeborenen Immunantwort mitprägt. Über diese barriereassoziierten Prozesse greift LYPD8 in Signalwege ein, die mukosale Abwehr, Entzündung und mikrobiomabhängige Signalübertragung steuern. Eine veränderte Expression oder Funktion von LYPD8 wurde mit intestinalen Entzündungszuständen und epithelialen Stressantworten in Verbindung gebracht, was seine Relevanz in Modellen für Kolitis, Dysbiose und Barrierefunktionsstörungen unterstreicht.

LYPD8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LYPD8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LYPD8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LYPD8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LYPD8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LYPD8-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LYPD8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LYPD8-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LYPD8-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LYPD8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.