Plásmido CRISPR de Activación (h) Ly6G6d: sc-403030-ACT

LY6G6D codifica Ly6G6d, un miembro de la familia Ly6/uPAR anclado por glicosilfosfatidilinositol (GPI), enriquecido en contextos relacionados con el sistema inmunitario y que se cree que influye en las interacciones célula–célula en la membrana plasmática. Como proteína asociada a la superficie, Ly6G6d se estudia por su papel en la modulación de la transducción de señales, la organización de microdominios de membrana y la comunicación entre células inmunitarias dentro de microambientes inflamatorios y asociados a tumores. Se han descrito alteraciones en la expresión de LY6G6D en múltiples conjuntos de datos de cáncer e inmuno-oncología, lo que respalda su uso como marcador molecular en estudios de infiltración inmunitaria y de crosstalk entre epitelio e inmunidad. Estas características convierten a LY6G6D en una diana relevante para desentrañar vías que vinculan la regulación de antígenos de superficie con la señalización inmunitaria y programas transcripcionales asociados a enfermedad.

Ly6G6d El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LY6G6D sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ly6G6d El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LY6G6D en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LY6G6D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ly6G6d. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LY6G6D y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ly6G6d en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ly6G6d en células tumorales con expresión de LY6G6D silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.