Plásmido Doble Nickase (h) Ly-GDI/RhoGDI2/ARHGDIB: sc-402326-NIC

ARHGDIB codifica Ly-GDI/RhoGDI2, un inhibidor de la disociación de GDP de Rho que se une a GTPasas preniladas de la familia Rho, como RAC1, RHOA y CDC42, para controlar su asociación a la membrana, el ciclo de activación y el tráfico subcelular. Al modular la señalización de las GTPasas Rho, Ly-GDI influye en la remodelación del citoesqueleto de actina, la adhesión y migración celular, el tráfico vesicular y funciones inmunitarias de las células vinculadas a la NADPH oxidasa. Por ello, la actividad de ARHGDIB está estrechamente relacionada con vías que regulan la quimiotaxis de leucocitos, la señalización inflamatoria y las interacciones con barreras tisulares. La desregulación del control de las GTPasas Rho y de la expresión de ARHGDIB se ha asociado con cambios en el comportamiento de células inmunitarias y con fenotipos relevantes para enfermedad en contextos de investigación hematológica e inflamatoria.

Ly-GDI/RhoGDI2/ARHGDIB El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARHGDIB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARHGDIB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARHGDIB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARHGDIB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.