Plasmide Double Nickase (h) Lunapark: sc-407336-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Lunapark correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Lunapark Double Nickase (h) et le plasmide Lunapark Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LNPK. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Lunapark | sc-407336-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **LNPK** code **Lunapark**, une protéine membranaire du réticulum endoplasmique (RE) qui se localise aux jonctions à trois voies du RE et contribue à stabiliser le réseau tubulaire du RE. Lunapark participe à la morphogenèse du RE et au maintien de l’équilibre entre feuillets et tubules du RE, en coordination avec des facteurs de remodelage membranaire qui soutiennent l’architecture de l’organite, la gestion des lipides et la signalisation intracellulaire. Comme la structure du RE est étroitement liée à la protéostasie, à l’homéostasie du calcium et aux réponses au stress du RE, la perturbation de **LNPK** est pertinente pour l’étude des voies d’adaptation cellulaire qui influencent la vulnérabilité des neurones et des cellules sécrétoires. Des altérations de la dynamique du réseau du RE ont été associées à des mécanismes impliqués dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, faisant de **LNPK** une cible utile pour disséquer la biologie des maladies liée à l’organisation du RE.
Lunapark Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LNPK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LNPK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LNPK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LNPK.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.