LTRPC7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402820-ACT

TRPM7 (LTRPC7) kodiert eine bifunktionale Kanal-Kinase, die zweiwertige Kationen leitet, insbesondere Mg²⁺ und Ca²⁺, und über ihre Serin/Threonin-Kinasedomäne die Ionenhomöostase mit der intrazellulären Signalübertragung koppelt. Die TRPM7-Aktivität beeinflusst das Membranpotenzial, die Zytoskelettdynamik sowie Zelladhäsion und -migration und ist in Signalwege integriert, die Proliferation, Differenzierung und Stressantworten steuern. Durch die Regulation Mg²⁺-abhängiger enzymatischer Prozesse und Ca²⁺-gekoppelter Signalwege trägt TRPM7 zur Kontrolle des zellulären Stoffwechsels und des Überlebens bei. Eine fehlregulierte TRPM7-Expression oder -Funktion wurde mit veränderter Erregbarkeit und Umprogrammierungen/Remodeling-Prozessen in Verbindung gebracht, die in Modellen neurologischer Schädigung, der kardiovaskulären Pathophysiologie und Krebszell-Phänotypen eine Rolle spielen, was seine Eignung als mechanistisches Ziel in der funktionellen Genomik unterstreicht.

LTRPC7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TRPM7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LTRPC7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TRPM7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TRPM7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LTRPC7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TRPM7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LTRPC7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LTRPC7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TRPM7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.