LTK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405150

Descripción general

La tirosina cinasa receptora de leucocitos (LTK) codifica una tirosina cinasa receptora que participa en la señalización sensible a factores de crecimiento y en la modulación de cascadas aguas abajo como MAPK/ERK y PI3K/AKT, influyendo en la proliferación, la diferenciación y la supervivencia celulares. La actividad de LTK se ha relacionado con la regulación de programas de secreción y tráfico en tipos celulares selectos, incluidas líneas asociadas al sistema inmunitario, en consonancia con funciones en el control del estado celular. La desregulación de la señalización de tirosina cinasas receptoras, incluidos cambios en la expresión de LTK o en su actividad cinasa, es relevante para estudios de redes de señalización oncogénica y de transformación específica de linaje. Como receptor de superficie acoplado a una cinasa, LTK también se utiliza como un nodo para analizar la señalización por fosfotirosina, la comunicación cruzada entre receptores y la reconfiguración de vías bajo perturbación genética.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LTK (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LTK en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LTK junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LTK tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LTK.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LTK para la investigación de la señalización de LTK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de LTK críticos para la función de LTK
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LTK para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LTK CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LTK CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LTK. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LTK (h) y el plásmido HDR LTK (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LTK para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LTK definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.