Plasmide CRISPR d'Activation (h) LSM8: sc-404816-ACT

Le gène humain **LSM8** code une protéine de liaison à l’ARN de type Sm, composant central de la petite ribonucléoprotéine nucléaire U6 et de l’anneau LSm2–8, contribuant à la stabilité de l’ARNsn U6, à la biogenèse des snRNP et à l’assemblage du spliceosome lors de l’épissage du pré‑ARNm. Par ces fonctions, LSM8 participe à une élimination fidèle des introns et à l’intégrité du transcriptome, l’inscrivant dans des réseaux de traitement de l’ARN qui modèlent la progression du cycle cellulaire et des programmes d’expression génique sensibles au stress. La perturbation de l’homéostasie du spliceosome et des snRNP est largement associée à l’apparition d’isoformes d’ARNm aberrantes et à une expression génique dérégulée dans de multiples contextes pathologiques, ce qui fait de LSM8 un nœud utile pour des études mécanistiques des phénotypes dépendants de l’épissage. Son rôle essentiel dans le métabolisme de l’ARN offre également un point d’entrée bien défini pour examiner comment des facteurs d’épissage centraux influencent l’état cellulaire et la diversité du protéome.

LSM8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LSM8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LSM8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LSM8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LSM8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LSM8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LSM8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LSM8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LSM8 dans les cellules tumorales présentant une expression de LSM8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.