LRP1B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404088-ACT

LRP1B (LDL-Rezeptor-verwandtes Protein 1B) ist ein großer endozytotischer Rezeptor aus der LDL-Rezeptorfamilie, der an der rezeptorvermittelten Internalisierung extrazellulärer Liganden sowie an der Modulation der Verfügbarkeit von Zelloberflächenproteasen und Wachstumsfaktoren beteiligt ist. Über seine Effekte auf Endozytose und den Umsatz von Membranproteinen kann LRP1B die Lipidverarbeitung, den Umbau der extrazellulären Matrix und Signalwege beeinflussen, die mit Zelladhäsion und Migration verknüpft sind. Veränderte LRP1B-Expression oder genomische Störungen wurden in mehreren krebsassoziierten Datensätzen beschrieben und werden im Zusammenhang mit Tumorentwicklung, Invasion und immunbezogenen Merkmalen untersucht; zusätzlich besteht Interesse an seiner Rolle in der neuronalen sowie kardiometabolischen Biologie. Daher wird LRP1B häufig als Regulator zellulärer Aufnahmeprozesse und mikroumgebungsbezogener Signalgebung betrachtet, die für Krankheitsmechanismen relevant sind.

LRP1B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LRP1B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LRP1B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LRP1B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LRP1B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LRP1B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LRP1B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LRP1B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LRP1B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LRP1B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.