LRP16 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405616

Descripción general

MACROD1 codifica LRP16, una proteína nuclear que contiene un macrod dominio, se une a ADP-ribosa y actúa como un “borrador” de la mono-ADP-ribosilación en proteínas diana. LRP16 participa en la regulación de programas de transcripción y de procesos asociados a la cromatina, incluido el diálogo cruzado con la señalización de receptores hormonales nucleares y con las vías de ADP-ribosilación dependientes de PARP que influyen en las respuestas al daño del ADN. A través de estas actividades, MACROD1 puede afectar el control del ciclo celular, la señalización de estrés y el mantenimiento de la estabilidad genómica. Se han descrito alteraciones en la expresión o función de MACROD1/LRP16 en múltiples contextos tumorales, y con frecuencia se investiga en relación con la proliferación, la señalización de supervivencia y la reprogramación transcripcional.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LRP16 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MACROD1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MACROD1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MACROD1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LRP16.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MACROD1 para la investigación de la señalización de LRP16, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MACROD1 críticos para la función de LRP16
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MACROD1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LRP16 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LRP16 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MACROD1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LRP16 (h) y el plásmido HDR LRP16 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MACROD1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MACROD1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.