LRP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400638-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LRP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LRP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und LRP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LRP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LRP1: sc-57353
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LRP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400638-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LRP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400638-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LRP1 (low-density lipoprotein receptor–related protein 1) ist ein multifunktioneller endozytotischer und Signalrezeptor, der die Aufnahme und Entfernung verschiedenster Liganden vermittelt, darunter Lipoproteine, Protease-Inhibitor-Komplexe und Komponenten der extrazellulären Matrix. Durch Interaktionen mit Adapterproteinen und Crosstalk mit Signalwegen wie TGF-β, MAPK/ERK und PI3K–AKT beeinflusst LRP1 das Rezeptor-Trafficking, die Lipidhomöostase, Zellmigration sowie Überlebensprogramme. Im Nervensystem und in der Gefäßwand trägt LRP1 zum Transport über die Blut-Hirn-Schranke und zur Regulation der Proteolyse bei und ist damit mit Mechanismen verknüpft, die für Neurodegeneration, Atherosklerose und die invasionsbiologische Komponente von Krebs relevant sind. Diese Funktionen machen LRP1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung endozytoseabhängiger Signalübertragung, des Umbaus der extrazellulären Matrix und lipidgetriebener zellulärer Phänotypen.
LRP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LRP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LRP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LRP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LRP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.