Plásmido Doble Nickase (h) LPCAT1: sc-413287-NIC

LPCAT1 (lisofosfatidilcolina aciltransferasa 1) es una aciltransferasa asociada al retículo endoplásmico (RE) que cataliza la reacilación de la lisofosfatidilcolina para formar fosfatidilcolina, apoyando la biogénesis de membranas y la remodelación de fosfolípidos dentro del ciclo de Lands. Al determinar la composición de las especies de fosfatidilcolina, LPCAT1 influye en la curvatura de la membrana, el tráfico vesicular y la señalización dependiente de lípidos, y contribuye a la producción de fosfolípidos del surfactante en contextos epiteliales especializados. La expresión o actividad alteradas de LPCAT1 se han vinculado con programas desregulados del metabolismo lipídico y se han investigado en modelos de progresión tumoral y microambientes inflamatorios, donde la síntesis y remodelación de membranas están aumentadas. Como nodo del metabolismo de los glicerofosfolípidos, LPCAT1 se estudia con frecuencia por su impacto en las respuestas celulares al estrés, la proliferación y la adaptación metabólica.

LPCAT1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LPCAT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LPCAT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LPCAT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LPCAT1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.